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¿Se puede utilizar ELISA para detectar una enzima vegetal? Creando ensayo para una nueva enzima

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Si el objetivo es generar un ensayo rápido para una enzima de origen vegetal, ¿cuáles son las opciones típicas?

es decir, ¿se podría hacer algo como: generar un anticuerpo contra la enzima y luego usarlo para crear un ELISA? ¿Sería la inyección animal la forma de generar el anticuerpo específico necesario?

Si no es así, ¿qué se hace normalmente en tales casos? ¿Cómo se puede crear un ensayo para una nueva enzima de origen vegetal? ¿Existen enfoques alternativos que eviten la creación de anticuerpos?


Quiero agregar algo además de la respuesta de Chris.

La producción de un anticuerpo suele ser un proceso bastante lento (y costoso), una alternativa que vale la pena considerar es la exhibición de fagos (https://en.wikipedia.org/wiki/Phage_display). Una vez que encuentre el fago que se une de manera efectiva a su proteína de interés, puede usarlo en lugar de un anticuerpo en lo que se llama un ensayo ELISA de fagos. Sin embargo, tenga en cuenta que el ELISA (o Phage-ELISA) le dará información sobre la presencia y concentración de la enzima, no le dará ninguna pista sobre su actividad.


Creo que las rutas más prometedoras usan anticuerpos. Puede desarrollar un ELISA o realizar un análisis de transferencia Western de material vegetal; ambos necesitan un anticuerpo bueno y específico. Para generarlos, la proteína de interés (o al menos partes de ella) se inyectan en animales (típicamente ratones o conejos) y luego se vierten los anticuerpos de la sangre de estos animales. Estos anticuerpos son policlonales, pero este enfoque es bastante rápido y se puede realizar en unas pocas semanas.

Si desea utilizar una fuente más sostenible de anticuerpos, las células productoras de anticuerpos de estos animales se aíslan, inmortalizan y caracterizan como clones individuales para obtener anticuerpos monoclonales.

Dado que está utilizando una enzima, también podría pensar en ensayos de actividad. Entonces, o se metaboliza un sustrato cromogénico o fluorogénico, o puede usar reacciones acopladas donde su enzima usa un sustrato que se rellena con otra reacción; los ejemplos clásicos aquí son reacciones acopladas que usan NADH o ATP.

También es posible medir la tasa metabólica si el sustrato o el producto de su enzima muestra fluorescencia. Luego, puede medir la disminución de su sustrato o el aumento de su producto.


  • Placa ELISA lista para usar con preparación de muestras rápida y sencilla
  • Rendimiento preciso, sensible y consistente
  • Validado en suero, plasma, saliva, sobrenadante de cultivo celular y orina
No gato. nombre del producto Precio
L00847 Kit de detección de anticuerpos de neutralización del SARS-CoV-2 Cita
L00845 Kit de detección ELISA de IgG y ampIgM para SARS-CoV-2 Spike S1-RBD Cita
L00846 Kit de detección de ELISA de anticuerpos totales para SARS-CoV-2 NP y ampRBD Cita

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Pruebas ELISA

ELISA es una abreviatura de "ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas". En 1974, P. Perlmann y E. Engvall desarrollaron la prueba como un sustituto de ciertas pruebas de radioinmunoensayo y, finalmente, reemplazó la prueba de Western blot para la confirmación del VIH. La prueba ELISA es versátil y los profesionales médicos pueden realizarla fácilmente en comparación con otras pruebas más complicadas. Hay muchas variaciones disponibles comercialmente.

¿Qué es una prueba ELISA?

Una prueba ELISA utiliza componentes del sistema inmunológico (como anticuerpos IgG o IgM) y sustancias químicas para la detección de respuestas inmunitarias en el cuerpo (por ejemplo, a microbios infecciosos). La prueba ELISA involucra una enzima (una proteína que cataliza una reacción bioquímica). También involucra un anticuerpo o antígeno (moléculas inmunológicas) que pueden formar una reacción antígeno-anticuerpo para proporcionar un resultado positivo o, si no reaccionan, un resultado negativo. Los ejemplos de los usos de una prueba ELISA incluyen el diagnóstico de infecciones como el VIH (virus de inmunodeficiencia humana) y algunas enfermedades alérgicas como alergias alimentarias e investigaciones experimentales para identificar compuestos (antígenos de un lisado celular en una amplia gama de organismos). Las pruebas ELISA también se conocen como ensayo inmunoabsorbente o inmunoensayo enzimático cuando una enzima se une a otra sustancia como indicador (puede provocar un cambio de color, por ejemplo).

La prueba se basa en una placa de microtitulación que tiene un sustrato en fase sólida (proteína diana, antígeno) a una concentración conocida fijada a la placa que cuando se expone a un anticuerpo que tiene un indicador adherido (tinte para cambio de color o anticuerpo marcado con enzima) que puede producir un cambio de color. Dependiendo de una curva estándar para la absorción del anticuerpo marcado con enzima frente al nivel de antígeno en relación con el cambio de color del tinte, las pruebas pueden proporcionar semicitas, cuantitativas y / o identificación de muchas sustancias diversas. Este tipo de prueba se denomina ELISA directo.

Existen otros tipos de pruebas ELISA. El ELISA indirecto usa un anticuerpo secundario para adherirse al sustrato y el ELISA tipo sándwich que usa el anticuerpo como sustrato fijado a la placa de microtitulación. Para obtener ejemplos y detalles adicionales, consulte http://ruo.mbl.co.jp/bio/e/support/method/elisa.html.

Tipos de pruebas ELISA

Prueba de VIH

La prueba de anticuerpos generalmente se realiza en una muestra de sangre, a menudo usando un ensayo ligado a enzimas llamado ELISA o EIA. En esta prueba, se permite que el suero de una persona reaccione con las proteínas del virus que se han producido en el laboratorio. Si la persona ha sido infectada con el VIH, los anticuerpos en el suero se unirán a las proteínas del VIH y se puede medir el grado de esta unión. Los resultados negativos de la EIA suelen estar disponibles en un día más o menos.

¿Para qué sirve una prueba ELISA?

Las pruebas ELISA detectan principalmente proteínas (a diferencia de pequeñas moléculas e iones como glucosa y potasio). Los profesionales médicos utilizan con frecuencia las pruebas ELISA como análisis de sangre para detectar antígenos que pueden estar presentes en la sangre. Las sustancias detectadas por las pruebas de ELISA pueden incluir hormonas, un alérgeno, antígenos virales (fiebre del dengue, por ejemplo), antígenos bacterianos (TB, por ejemplo) y anticuerpos que el cuerpo ha producido en respuesta a una infección (anticuerpos contra la hepatitis B, por ejemplo). ejemplo) o vacunación. También pueden identificar un agente patógeno infeccioso en los pacientes.

¿Qué es un kit de ELISA?

Un kit ELISA es una prueba ELISA disponible comercialmente que generalmente contiene placas de poliestireno prerrevestidas, anticuerpos de detección y, por lo general, todos los productos químicos necesarios para realizar una prueba ELISA. Sin embargo, las personas pueden adquirir kits especiales con sustancias designadas por el cliente.

DIAPOSITIVAS

¿Cómo funciona la prueba ELISA??

Existen variaciones de la prueba ELISA (ver más abajo), pero el tipo más utilizado consiste en un anticuerpo adherido a una superficie sólida (placa de poliestireno). Este anticuerpo tiene afinidad por (se adherirá a) la sustancia de interés, como una hormona, una bacteria u otro anticuerpo. Por ejemplo, la hormona gonadotropina coriónica humana (HCG), la proteína comúnmente medida que indica embarazo, puede detectarse mediante ELISA. Se agrega una mezcla de HCG purificada ligada a una enzima y la muestra de prueba (sangre u orina) al sistema de prueba. Si no hay HCG presente en la muestra de prueba, solo la enzima enlazada se unirá a la superficie sólida. Cuanta más sustancia de interés esté presente en la muestra de prueba, menos enzima enlazada se unirá a la superficie sólida. Cuanta más sustancia de interés esté presente, causará una reacción y aparecerá en la placa de prueba de alguna manera, como un cambio de color de la solución (o como una prueba de embarazo & quot; dos líneas rosadas & quot o una & quot + & quot; marca).


Sustratos ELISA quimioluminiscentes

Ofrecemos varios sustratos quimioluminiscentes para el desarrollo de ELISA con enzima peroxidasa de rábano picante (HRP) y fosfatasa alcalina (AP):

¹ Número total de ensayos basados ​​en microplacas de 96 pocillos. Consulte las instrucciones del producto para obtener información adicional y consideraciones sobre el ensayo que determinan el número de ensayos.
² Los límites de detección y las diluciones de anticuerpos recomendadas (basadas en 1 mg / ml de stock) se han generalizado como un medio para comenzar la optimización. Los ensayos individuales pueden requerir condiciones fuera de los rangos sugeridos aquí.
³ La longitud de onda de emisión máxima se proporciona como referencia. Sin embargo, para obtener la mejor sensibilidad, mida la salida de luz total con un luminómetro.

Sustratos de ELISA quimioluminiscentes de un vistazo

CSPD y CDP-Star son sustratos de fosfatasa alcalina 1,2-dioxetano quimioluminiscentes que emiten luz con una intensidad luminosa máxima a una longitud de onda de 475 nm. Estos sustratos son sustratos "luminosos" y proporcionan una señal máxima sostenida a lo largo del tiempo solo después de 15 a 60 minutos, según la temperatura. Se suministran a 5 o 25 mM (respectivamente) en tampón acuoso. La sensibilidad se puede mejorar con la adición de potenciadores de luminiscencia Sapphire-II o Emerald-II.

El sustrato DynaLight con RapidGlow Enhancer es una formulación de sustrato quimioluminiscente lista para usar que se ha optimizado para lograr resultados más rápidos en ensayos basados ​​en solución. Este sustrato se clasifica como un sustrato de destello y brillo que proporciona una señal máxima rápida y sostenida en tan solo 2 a 10 minutos. La fórmula del sustrato DynaLight con RapidGlow Enhancer incluye un sustrato quimioluminiscente de 1,2-dioxetano y un potenciador polimérico que permite la detección de inmunoensayos ultrasensibles mediante el marcador de fosfatasa alcalina.

El sustrato quimioluminiscente SuperSignal ELISA Pico proporciona un rendimiento excelente para una amplia gama de cantidades de proteínas objetivo y se optimiza fácilmente para detectar con mayor sensibilidad que los sustratos colorimétricos de nivel de entrada. Generación de señal rápida con estabilidad de señal de 5 a 30 minutos dependiendo de la concentración de HRP.

El sustrato de máxima sensibilidad SuperSignal ELISA Femto es uno de los sustratos más sensibles disponibles para aplicaciones ELISA. Cuando se optimiza correctamente, el límite de detección inferior es de 1 a 10 órdenes de magnitud más bajo que los sustratos colorimétricos de uso común. Sin embargo, sin una optimización adecuada, es fácil sobrecargar el sistema con proteínas y enzimas, lo que da como resultado un fondo alto y posiblemente resultados negativos.


Inmunoensayos: matrices de proteínas frente a ELISA y occidentales

Los estudios de sistemas biológicos se han expandido más allá del paradigma de "un gen, una proteína" al campo de la proteómica, o al estudio de un gran número de proteínas que actúan en un concierto de sistemas biológicos complejos. Por lo tanto, en la era posterior al genoma, la tecnología se ha impulsado para ofrecer ensayos multiplex que nos permiten monitorear múltiples proteínas en paralelo, lo que resulta en información más relevante desde el punto de vista biológico. Los ensayos multiplex se utilizan para la investigación básica y el descubrimiento de fármacos para observar miles de proteínas o un "proteoma" en una muestra. Para el diagnóstico clínico, es suficiente monitorear solo unas pocas proteínas junto con los controles. En ambos casos, sin embargo, la especificidad, la sensibilidad, la disponibilidad de la muestra, los costos de los reactivos y la conveniencia de uso son los principales criterios para seleccionar un protocolo.

Los inmunoensayos siguen siendo la plataforma preferida para la mayoría de los estudios de proteínas, en particular los diagnósticos clínicos y el desarrollo de fármacos, donde la especificidad es fundamental. Los ensayos basados ​​en anticuerpos que incluyen la captura inmune en dispositivos de flujo lateral, inmunotransferencia (Western blot) y ELISA (Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas) han existido durante décadas y están ampliamente adaptados al diagnóstico clínico. En la mayoría de los casos, la primera opción es la conveniencia: utilizar la tecnología disponible y la que ya se ha instalado en el laboratorio o en la comunidad vecina. Este artículo describe las características relativas y los beneficios de los ensayos basados ​​en anticuerpos, comparando micromatrices de proteínas, ELISA y Western.

Los Western Blots se realizan típicamente para determinar la presencia e integridad de una proteína específica. En este ensayo, primero se separa una mezcla de proteínas basándose en el peso molecular y / o la carga mediante electroforesis en una matriz de gel, luego se transfiere a una membrana y se sondea con un anticuerpo específico para la proteína de interés. La cantidad relativa de proteína en diferentes muestras puede compararse y aproximarse. Debido a que las proteínas en una mezcla se separan primero de acuerdo con las propiedades físicas, la especificidad del Western puede ser muy alta, y cualquier reactividad cruzada del anticuerpo detector con otras proteínas en la mezcla se puede distinguir por el peso molecular conocido de la proteína. de interés. Las transferencias Western se limitan a la detección de proteínas desnaturalizadas porque todas las proteínas de la muestra se desnaturalizan antes de la etapa de electroforesis. En el lado negativo, las transferencias Western son relativamente complejas desde el punto de vista técnico, requieren muchos pasos y un volumen de muestra relativamente grande y, por lo tanto, no se automatizan fácilmente y son relativamente costosas y requieren mucho tiempo.

Los ensayos ELISA a menudo se realizan en placas de 96 pocillos y se adaptan a un rendimiento más alto que las transferencias Western, pero al igual que las transferencias Western, solo ofrecen datos monoplex o resultados de una única proteína por ensayo. A diferencia del ensayo Western, se puede usar un ELISA para detectar proteínas nativas e interacciones de proteínas que requieren una estructura tridimensional intacta. Los ensayos ELISA pueden ser altamente cuantitativos cuando se realizan con una curva estándar de la proteína conocida y anticuerpos bien caracterizados. Sin embargo, estos ensayos no son muy específicos y pueden dar falsos positivos debido a la reactividad cruzada del anticuerpo de detección con otras proteínas de la muestra. Los ensayos ELISA son muy útiles para observar interacciones de proteínas que requieren conformación nativa y para estudiar la competencia de unión. Además, los ensayos ELISA son técnicamente menos difíciles que las transferencias Western y se pueden adaptar a un mayor rendimiento con sistemas de detección y manipulación de placas automatizados.

Los microarrays de proteínas son más similares al ELISA que al Western blot porque generalmente las proteínas de una muestra no se fraccionan antes del ensayo. Al construir microarrays, las proteínas se depositan en pequeños puntos (100-300 um) en un portaobjetos de microscopio especialmente recubierto. El portaobjetos a menudo se recubre con un polímero como la nitrocelulosa o un gel que aumenta la capacidad de unión de la proteína. Los microarrays ofrecen ventajas de mayor rendimiento, análisis multiplex, bajo consumo de reactivo, alta sensibilidad y menor requerimiento de muestra en comparación con los ensayos Western o ELISA (consulte las Tablas I y II).

Las matrices de proteínas disponibles comercialmente están ahora disponibles que ofrecen matrices preimpresas de cientos a miles de proteínas, típicamente anticuerpos utilizados para capturar proteínas de forma muy similar a un ELISA. La fabricación de micromatrices es de hecho un proceso costoso y que requiere mucho tiempo y que generalmente no es factible para el investigador individual. Más importante aún, el contenido de anticuerpo manchado en microarrays es el componente más valioso y costoso. Sin embargo, la cantidad de anticuerpo requerida para una micromatriz, así como el requerimiento de muestra, es mucho menor que para ELISA. La micromatriz de proteínas conserva tanto los reactivos como las muestras preciosas. Por lo tanto, para ensayos de alto rendimiento o muy repetidos, los costos de reactivos reducidos, el ahorro de tiempo y la conservación de muestras para microarrays pueden superar el gasto relativo de configuración (es decir, imprimir o comprar las matrices, consulte la Tabla II). Además, la cantidad de proteína o anticuerpo puede estar limitada en algunos casos (por ejemplo, cantidades limitadas de anticuerpo policlonal o muestra de paciente para diagnóstico).

Grace Bio-Labs ha desarrollado tecnología líder para microarrays de proteínas sensibles y de alta calidad. Nuestros portaobjetos de película de nitrocelulosa proporcionan la mayor capacidad de unión a proteínas, lo que conduce a una excelente sensibilidad (hasta XX pg / ml). Hemos desarrollado un conjunto de reactivos diseñados para optimizar los resultados con estos arreglos en términos de sensibilidad (señal / ruido) y reproducibilidad. Si está interesado en desarrollar inmunoensayos en formato de microarrays de proteínas, lo invitamos a colaborar con nosotros con el contenido de su elección.

Tabla I: Propiedades relativas de Western Blot, ELISA y ensayos de microarrays.


ELISA paso a paso

El anticuerpo de captura específico se inmoviliza en placas de alta unión a proteínas mediante incubación durante la noche. Las placas se bloquean con una proteína irrelevante, p. Ej. albúmina.

Este paso se omite cuando se utilizan placas prerrevestidas de Mabtech.


Infección viral de influenza en el sistema respiratorio: posibles formas de monitoreo

3.8 Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas

ELISA es el método estándar de oro para detectar una amplia gama de moléculas diana asistidas con moléculas asociadas apropiadas. ELISA se utiliza no solo para la detección sino también para el cribado básico de muchas enfermedades importantes, como el VIH, la influenza, etc. Gopinath y col. 14 han demostrado la detección basada en ELISA del virus de la influenza mediante el uso de anticuerpos anti-H3N2 y han discriminado contra otros virus de la influenza. Debido a su alta sensibilidad y selectividad, ELISA ayuda a identificar las moléculas diana, incluso en las muestras crudas humanas (suero, orina y saliva). Hasta ahora, los anticuerpos se han utilizado comúnmente como sonda para detectar biomoléculas en ELISA. En general, la unión de la diana (antígeno) y la sonda (anticuerpo) en la placa ELISA fue detectada por la enzima (por ejemplo, peroxidasa de rábano picante (HRP), fosfatasa alcalina) conjugada con un anticuerpo secundario y detectada por sustratos cromogénicos. También se ha utilizado la conjugación de biotina-estreptavidina para mejorar los métodos ELISA. En este caso, el anticuerpo secundario biotinilado fue detectado por la enzima conjugada con estreptavidina. Se utilizan varios tipos de patrones en el método ELISA para mejorar los métodos de detección, como ELISA directo, indirecto, sándwich y competitivo. En la mayoría de los casos, se utilizó anticuerpo como sonda debido a su fuerte unión, estabilidad y selectividad. El ELISA tipo sándwich suele ser realizado por el anticuerpo monoclonal o policlonal de la diana específica (fig. 2.7). En algunos casos, solo se ha utilizado la región Fc del anticuerpo como molécula de captura en la placa ELISA. Después de la generación de aptámeros, algunos investigadores han utilizado aptámeros como sonda en lugar de anticuerpos. Este método se denomina ensayo inmunoabsorbente ligado a aptámeros (ALISA). 46 Dado que el aptámero tiene una mayor sensibilidad que el anticuerpo, es posible aumentar el límite de detección cuando se utiliza aptámero como sonda. Además, existe la posibilidad de realizar un ensayo sándwich con dos aptámeros diferentes para el mismo objetivo. Dado que tanto el aptámero como el anticuerpo son adecuados como moléculas de detección, existe una mayor posibilidad de aumentar el límite de detección con los patrones sándwich utilizando aptámero y anticuerpo.

Figura 2.7. Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA)

Básicamente, existen tres tipos de ELISA (directo, indirecto y sándwich). Aquí se muestra un ELISA tipo sándwich como ejemplo.


Abstracto

Veratrum californicum fue responsable de las grandes pérdidas de ovejas que pastaban en las altas montañas en el centro de Idaho en la década de 1950. Veratrum induce varios defectos de nacimiento, incluido el defecto craneofacial de tipo cíclope (corderos con cara de mono) que se induce específicamente en corderos después de que las ovejas preñadas pastorearon la planta en el día 14 de gestación. Los alcaloides esteroides ciclopamina (1) y jervine (2) fueron aislados de Veratrum y ha demostrado ser el principal responsable de las malformaciones. Ciclopamina (1) y jervine (2) son potentes teratógenos que inhiben la señalización del erizo sónico (Shh) durante el desarrollo embrionario en la etapa de gastrulación, produciendo ciclopía y holoprosencefalia. Aunque las pérdidas para la industria ovina por Veratrum son ahora relativamente infrecuentes, todavía se informan incidentes ocasionales de toxicosis y malformaciones craneofaciales en ovejas y otras especies. Sin embargo, los beneficios de la investigación biomédica con ciclopamina (1) como herramienta para estudiar las enfermedades humanas se han expandido enormemente. Un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas de inhibición competitiva (ELISA) para detectar y medir ciclopamina (1) y jervine (2) se desarrolló utilizando anticuerpos policlonales producidos en ovejas. Los límites de detección del ensayo fueron 90,0 y 22,7 pg para ciclopamina (1) y jervine (2), respectivamente. Este ensayo se utilizó para la detección y medición de ciclopamina (1) añadido a sangre de oveja. Los métodos simples de extracción-ELISA desarrollados en este estudio demuestran el potencial de utilizar estas técnicas para el cribado rápido de muestras biológicas para detectar la presencia y concentración de ciclopamina (1) y jervine (2) y será beneficioso para los estudios farmacológicos y el diagnóstico del ganado.

Palabras clave: ELISA inmunoensayo enzimático ciclopamina jervina Veratrum californicum alcaloides

Autor a quien debe dirigirse la correspondencia [teléfono (435) 752-2941 fax (435) 753-5681 correo electrónico [email & # 160protected]].


Introducción

Más de la mitad de todas las proteínas conocidas están glicosiladas, pero solo recientemente hemos comenzado a comprender la importancia de los oligosacáridos complejos (glicanos) unidos a las cadenas principales de proteínas [1]. Quizás esto no sea sorprendente, ya que las estructuras ramificadas de los azúcares hacen que el análisis de glicoconjugados sea significativamente más desafiante que el análisis de secuencias lineales de ADN y proteínas. Sin embargo, una parte significativa de más de la mitad de todas las proteínas y de casi todas las proteínas de membrana y extracelulares son glucanos [2]. Para poder comprender la función de las glicoproteínas, también debemos comprender sus restos de glicanos. Esto es particularmente importante en el campo del diagnóstico molecular, donde los glicanos están demostrando ser cada vez más importantes [3].

Las estructuras de glicanos son extremadamente complejas y su análisis requiere métodos complejos que consumen mucho tiempo como HPAEC, HLPC de fase normal o espectrometría de masas [4], [5], [6]. Estos métodos no son convenientes en el laboratorio clínico de rutina y se necesitan métodos más simples para permitir el análisis de glicosilación para aplicaciones clínicas. Desde su introducción a principios de los años setenta [7], el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) se ha utilizado para diversas aplicaciones, incluido el análisis de glicosilación. Además de los métodos que utilizan anticuerpos específicos para el análisis de la glicosilación, también se ha desarrollado un método modificado que utiliza lectinas en lugar de anticuerpos (ELLA, ensayo de lectina ligada a enzimas) [8]. A diferencia de los diversos métodos ELISA que ahora se utilizan habitualmente en la clínica, un pequeño número de laboratorios de investigación utiliza los métodos ELLA (66244 artículos con ELISA frente a 86 artículos con ELLA en Título o Abstracto campos de PubMed entre 1971 cuando se utilizó por primera vez ELISA y 2006). Las razones de esta situación son muy complejas e incluyen tanto la naturaleza de la glicosilación como la forma en que las lectinas interactúan con las glicoproteínas. Las lectinas reconocen estructuras de carbohidratos específicas y (al menos en el caso de lectinas de plantas que se utilizan como herramienta para analizar la glicosilación) generalmente no interactúan con las cadenas principales de proteínas a las que se unen estas estructuras. Por lo tanto, cuando se utilizan lectinas para estudiar la glicosilación, miden la presencia de una estructura de carbohidrato correspondiente en todas las proteínas de la muestra analizada y no solo en una proteína individual de interés. Para poder analizar la glicosilación de una proteína específica, esta proteína debe purificarse o capturarse con anticuerpos específicos adsorbidos en una placa de microtitulación. La purificación previa de una proteína no es práctica para fines de diagnóstico, por lo que la captura-ELLA sería un método de elección. Sin embargo, los anticuerpos también están glicosilados, lo que dificulta significativamente su aplicación para este propósito. Las lectinas se unen no solo a los glucanos de la proteína capturada, sino también a los glucanos de los anticuerpos utilizados para capturar la proteína de la muestra.

En este estudio, hemos seleccionado la transferrina como proteína modelo para el desarrollo de un ensayo simple y rápido para la glicosilación de proteínas. La transferrina sérica es una proteína particularmente interesante para el análisis de la sialilación. La mayoría de las moléculas de transferrina en la circulación están glicosiladas mediante la unión de solo dos glicanos biantenarios simples (Fig. 1) [9], lo que simplifica la interpretación de los resultados experimentales. Se han informado cambios en la glicosilación de la transferrina en muchas enfermedades [10], [11], [12], y también se están utilizando para identificar trastornos congénitos de la glicosilación y enfermedades hepáticas [13]. Sin embargo, todos los métodos aplicados anteriormente requieren mucho tiempo y no son aplicables en el laboratorio clínico de rutina. Con el objetivo de permitir el análisis de rutina de la sialilación de la transferrina en suero, hemos desarrollado un método ELLA simple y confiable que captura la transferrina usando anticuerpos oxidados con peryodato y compara su sialilación con muestras estándar.


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Ver el vídeo: Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas ELISA. Iniciación científca #21 (Mayo 2022).


Comentarios:

  1. Geedar

    Qué maravillosas palabras

  2. Faejin

    ¿Entiéndeme?

  3. Mazil

    ¿Por qué no?

  4. Orran

    Probablemente, estoy equivocado.

  5. Kazizuru

    Gracias. Información muy útil

  6. Stevan

    Mal gusto total



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